1.物理混合法

• 原理：

• 基于 DOPE 和 ICG 之間的物理相互作用，如疏水相互作用。DOPE 的疏水部分（脂肪酸鏈）能夠與 ICG 分子的疏水區(qū)域相互吸引，從而將 ICG 包裹在 DOPE 形成的結(jié)構(gòu)中，形成 DOPE - ICG 復(fù)合物。

步驟：

• 溶解 DOPE：將 DOPE 溶解在合適的有機溶劑中，常用的有機溶劑有氯仿或二氯甲烷。例如，在通風(fēng)良好的通風(fēng)櫥中，將適量的 DOPE（如 10 - 100mg）加入到裝有 1 - 10mL 氯仿的玻璃容器中，使用磁力攪拌器攪拌，直至 DOPE 全溶解，得到澄清的 DOPE 溶液。

• 溶解 ICG：同時，將 ICG 溶解在適當(dāng)?shù)娜軇┲?。由?ICG 在水中溶解度較低，通常選擇二甲基亞砜（DMSO）或 N,N - 二甲基甲酰胺（DMF）作為溶劑。例如，將一定量的 ICG（如 1 - 10mg）加入到 0.1 - 1mL 的 DMSO 中，超聲處理數(shù)分鐘，使其全溶解，形成 ICG 溶液。

• 混合溶液：在溫和攪拌的條件下，將 ICG 溶液緩慢滴加到 DOPE 溶液中。滴加過程要緩慢，以確保 ICG 能夠均勻地分散在 DOPE 溶液中。例如，使用滴管逐滴加入 ICG 溶液，同時保持?jǐn)嚢杷俣仍?100 - 500rpm 左右。

• 去除溶劑：將混合溶液轉(zhuǎn)移到旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中，在適當(dāng)?shù)臏囟龋ㄈ?30 - 50℃）和真空條件下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，去除有機溶劑。隨著溶劑的蒸發(fā)，DOPE 和 ICG 會逐漸聚集形成復(fù)合物。當(dāng)溶劑基本去除后，可得到含有 DOPE - ICG 復(fù)合物的固體或半固體物質(zhì)。

• 水化復(fù)合物：為了得到適合生物應(yīng)用的 DOPE - ICG 制劑，需要對上述固體或半固體物質(zhì)進行水化。加入適量的緩沖液（如磷酸鹽緩沖液，pH 7.2 - 7.4），緩沖液的體積可根據(jù)所需復(fù)合物的濃度來確定，一般為 1 - 10mL。然后通過超聲處理或溫和攪拌，使 DOPE - ICG 復(fù)合物均勻地分散在緩沖液中，形成穩(wěn)定的膠體溶液。

2.化學(xué)偶聯(lián)法

• 原理：

• 利用 DOPE 和 ICG 上的活性官能團進行化學(xué)反應(yīng)來實現(xiàn)偶聯(lián)。例如，如果 ICG 分子含有羧基（-COOH），DOPE 分子含有氨基（-NH?），可以通過偶聯(lián)試劑（如 1 - 乙基 - 3 - (3 - 二甲基氨基丙基) 碳二亞胺（EDC）和 N - 羥基琥珀酰亞胺（NHS））來促進酰胺鍵（-CONH -）的形成，從而將 ICG 和 DOPE 化學(xué)偶聯(lián)在一起。

3.步驟：

• 修飾反應(yīng)物（如果需要）：首先檢查 DOPE 和 ICG 的化學(xué)結(jié)構(gòu)，確定合適的反應(yīng)基團。如果反應(yīng)基團需要活化或修飾，要提前進行相應(yīng)的化學(xué)處理。例如，對于含有羧基的 ICG，可以通過與 NHS 反應(yīng)生成活性酯，使其更容易與氨基反應(yīng)。

• 溶解反應(yīng)物：將 DOPE 和 ICG 分別溶解在合適的反應(yīng)溶劑中。常用的反應(yīng)溶劑為緩沖液，如 MES 緩沖液（pH 5.5 - 6.5）或磷酸鹽緩沖液（pH 7.0 - 7.4），以提供合適的反應(yīng)環(huán)境。例如，將 DOPE 和 ICG 分別溶解在不同的緩沖液中，濃度可根據(jù)反應(yīng)的化學(xué)計量比來確定，一般為 0.1 - 10mM。

• 添加偶聯(lián)試劑：在攪拌的條件下，向反應(yīng)體系中依次加入偶聯(lián)試劑 EDC 和 NHS。EDC 和 NHS 的用量要根據(jù) ICG 和 DOPE 上反應(yīng)基團的摩爾數(shù)來確定，一般 EDC 過量 1.2 - 1.5 倍，NHS 過量 1 - 1.2 倍。例如，若 ICG 的羧基摩爾數(shù)為 1mmol，可加入 1.2 - 1.5mmol 的 EDC 和 1 - 1.2mmol 的 NHS。

• 進行反應(yīng)：將反應(yīng)體系在適當(dāng)?shù)臏囟龋ㄈ缡覝鼗?4 - 10℃）下反應(yīng)數(shù)小時至過夜。反應(yīng)過程中可以通過薄層色譜（TLC）或高效液相色譜（HPLC）來監(jiān)測反應(yīng)進程。例如，對于反應(yīng)較慢的體系，可以在室溫下反應(yīng) 24 - 48 小時，期間每隔一段時間取樣進行 TLC 或 HPLC 分析，觀察反應(yīng)物和產(chǎn)物的變化。

• 產(chǎn)物純化：反應(yīng)結(jié)束后，需要對產(chǎn)物進行純化，以去除未反應(yīng)的反應(yīng)物、偶聯(lián)試劑和副產(chǎn)物。常用的純化方法有柱層析、透析和超濾等。例如，采用柱層析法，選擇合適的固定相（如硅膠柱）和流動相（如不同比例的有機溶劑和緩沖液混合液），根據(jù)產(chǎn)物和雜質(zhì)的極性差異進行分離，得到純凈的 DOPE - ICG 偶聯(lián)物。

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